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PVDF印记膜技术交流 纯客户角度出发,公司不做任何修改和评论
发布时间:2013-11-12   点击次数:1578次

PVDF膜
    刚开始做WB的人也许会有这种疑问:为什么实验室的老师(或者师兄师姐们)在教我们做WB的时候,如果是用PVDF膜做,总是小心翼翼的剪,节省着用,甚至一些边边角角也舍不得丢掉呢?其实,这不仅是因为PVDF膜比较贵,还由于PVDF膜是做WB的“*”。

    聚偏二氟乙烯(PVDF)膜作为基质的转印膜由Millipore公司在1985年首先推出。与硝酸纤维素膜相比,PVDF膜在蛋白质截留能力,机械强度和化学相容性上都更优越的性能(Pluskal,et al.,1986)。市售硝酸纤维素膜的典型结合量是80-100μg/cm2,而PVDF膜结合量是100-200μg/cm2(而结合强度PVDF比硝纤膜强6倍!)。在艾滋病毒(HIV)血清学检验中直接比较PVDF和硝酸纤维素膜,PVDF膜具有更好的截留总HIV抗原能力并提高抗体检测糖基化被膜抗原的性能。但是PVDF膜zui大的优点不仅于此:更好的机械强度和化学耐受性使PVDF膜在各种染色应用和多重免疫检测中成为理想选择;而且单个凝胶的泳道复本可用于多种目的,如考马斯亮蓝染色后切出条带并进行N-末端测序、蛋白消化/肽分离/内部测序和免疫检测(Kurien,et al.,2003)。特别是需要做N端蛋白测序,在相当“严酷”的清洗条件下,当尼龙或者硝纤膜已经降解的情况下PVDF膜依然保持本色,笑傲江湖。所以PVDF也是要做蛋白测序的*选择。此外,个人经验,一些强疏水蛋白用PVDF膜效果会更好一些。PVDF膜适用的检测方法也不少,化学发光、常规显色、同位素和标准染色都一样OK,但不适合荧光。PVDF膜特别注意的是需要100%甲醇预处理(不超过15秒)再用缓冲液平衡,才能用,而且适用过程中万一干了也要同样程序再处理(不过要真出现这种问题也是自己欠扁,谁要你不小心呢,转膜前处理也就罢了,转膜后再这样处理可能会影响后继的抗体识别呢)。PVDF膜同样分0.45um和0.2um的,后者孔径小,对小分子蛋白有较好的拦截吸附,背景可能会比前者稍高。

PVDF膜常见的有以下几个品牌

公司

产品名

孔径

适用范围

参考价格

Millipore

Immobilon Transfer Membranes

0.45um 0.2um

 

2050.00

Bio-Rad

Immun-Blot PVDF Membrane

 

Chemiluminescent, colorimetric western blots, amino-terminal sequence and total amino acid composition

 

Pierce

PVDF Membrane

0.45um 0.2um

Western, Southern, Northern, and dot blots

 

Pall Life Science

BioTrace PVDF Transfer Membrane

0.45um

Nucleic acid and protein transfers. Protein sequencing

2200.00

Invitrogen

PVDF Membrane

0.45um
0.2um

Protein sequencing, immunoblotting

 

Whatman

Westran Clear Signal PVDF Membrane

0.45um

Western blots

 

    作为PVDF膜的鼻祖,Millipore公司的PVDF膜Immobilon系列分为Immobilon-P(0.45um), -PSQ(0.2um), -FL(用于荧光显色)和Blotting Sandwiches for High Troughput四种。Immobilon-P膜孔径均一,具有*的吸附能力,染色性能好、抗溶剂能力强和信噪比高,有助于提高检测灵敏度,而且开放的孔结构容易接近被吸附的蛋白质,并有助于去除背景上没有吸附的探针,可以说是免疫印迹检测理想的印迹膜。Immobilon-PSQ转印膜是印迹小分子蛋白质(<20KDa)的理想选择——优良的蛋白质吸附性能,渗漏少。内表面面积较大,可供蛋白质吸附从而提高蛋白质测序的得率。由于不含污染性支撑物或表面活性剂,Immobilon-PSQ层析谱上的背景峰值极小。Immobilon-FL也是Millipore值得骄傲的产品,因为这是*个专门为荧光显色优化的转移膜。通过实验证明,这种膜在Kodak成像系统可以显示仅7ng的蛋白,听起来不错吧,有兴趣可以试一试。这几种膜除了一般的PVDF膜的优点之外,zui大特点就是一个字——快。按照Millipore的操作手册,Immobilon可以在保证质量的前提下缩短WB时间到2个小时——主要是缩短封闭和洗脱时间。这可真是个好消息,因为坐在那儿等WB结果多浪费时间啊!缩短这个费时而枯燥的过程,早出结果,可以提高实验效率,利于我们分析实验结果,考虑下步对策嘛。卷膜经济实惠,裁剪剩下的边角料还可以用来做点杂交,而预裁剪的即用膜更适合高通量等等“用金钱换时间”的实验。再次强调的是,疏水PVDF膜在用前必须经过50%或以上体积比的甲醇或者乙醇溶液处理几分钟,待膜变成半透明后用MilliQ水或者纯水漂洗一下,转入电泳缓冲液平衡才能用。

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